猪Ghrelin基因的克隆及原核表达

从猪下丘脑、胃等组织中提取总RNA，根据已发表的猪的Ghrelin mRNA序列设计合成引物，通过RT-PCR进行cDNA扩增，获得了282bp的片段。将该片段克隆于pMD-18T载体后进行序列分析，确认PCR产物为Ghrelin cDNA。从阳性克隆中提取质粒，经NheⅠ和XhoⅠ双酶切，回收282bp的目的片段，定向克隆到pET-28a表达载体中，提取质粒并再次转化到BL21（DE3）中，成功地筛选出阳性克隆。经IPTG诱导阳性菌，通过SDS-PAGE检测出猪Ghrelin基因的表达．     

苦马豆素人工抗原免疫山羊的安全性试验

试验通过分析疯草毒素人工抗原(疫苗)SW BSA免疫山羊时对机体肝功、肾功的影响,进行安全性评价。将30只羊随机分为对照组(6只)、免疫A组(12只)、免疫B组(12只),免疫组依次进行基础免疫、首免、加强免疫,每次免疫前进行采血,分析血清中谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)、尿素氮(BUN)、α苷露糖苷酶(AMA)、碱性磷酸酶(AKP)、乳酸脱氢酶(LDH)的变化,同时检测尿液中有无SW。结果表明,免疫组与对照组的血清GPT、GOT、BUN、AMA、AKP、LDH差异均不显著(P>0.05),尿液中未检查出SW。     

猪群HEV血清抗体调查及一株新的猪HEV ORF2部分基因序列分析

戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)主要引起人的戊型肝炎,新近研究发现猪在病毒传播中可能发挥重要作用.本研究对我国部分省区HEV感染血清学调查,在被检的1 138份血清中,有666份(57.5%)为HEV抗体阳性,猪群抗体阳性率随着月龄增长而升高.通过RT-PCR方法从一份猪粪中扩增并克隆了HEVORF2 N端主要抗原决定区339bp基因片段,序列分析显示,该段基因与我国人群HEV基因4型毒株核苷酸序列同源性为85.9%,但氨基酸序列完全一致.这一结果提示我国猪群存在广泛的HEV感染,并在一定程度上与人群HEV毒株密切相关.     

噬菌体展示三肽囊素模拟肽的研究

本研究分离纯化抗Bursin单克隆抗体(2F9-4/HU2),利用噬菌体环7肽库筛选抗Bursin单克隆抗体(2F9-4/HU2)结合肽,测定阳性克隆ssDNA序列,并与Bursin序列进行同源性分析,通过ELISA法检测其结合活性和竞争ELISA法检测其抗原性,以Busin为对照,验证阳性克隆(№4)在鸡体内的生物学效应.序列分析表明,"LNXT"短肽序列可能为结合抗Bursin单克隆抗体(2F9-4/HU2)的保守序列,但与Bursin无同源性;噬菌体(№1)在序列中含有K、H、G.ELISA和竞争ELISA检测,表明Bursin对阳性克隆1、4、5、6号和抗Bursin单克隆抗体(2F9-4/HU2)的结合有一定的抑制作用:生物学活性初步验证表明,阳性克隆(№4)与Bursin具有类似作用,能促进抗体产生,有望成为一种模拟Bursin新型的免疫增强剂.     

猪瘟病毒持续感染与猪瘟预防控制

研究证明,在自然条件下,猪瘟病毒持续感染通常是在免疫力较低的情况下,由于环境中的病毒反复感染产生的,由于感染猪还有一定的免疫力,病毒虽然可以在其体内局部存留,但还不足以引起猪发病.一般情况下,感染猪虽然持续带毒,但不表现临床症状,然而却可以不断向外排毒,再次感染其他猪,污染环境;带毒的种猪可以通过母猪的胎盘和公猪的精液传播给仔猪,造成仔猪的先天免疫耐受,导致疫苗免疫失败.实验还证明,即使在良好的免疫状况下,反复多次人工感染猪瘟强毒也可造成持续感染.由此可见,猪瘟病毒持续感染是一个复杂的问题.     

山羊痘灭活疫苗免疫保护试验

将山羊痘GT4-STV42-56种毒在犊牛睾丸细胞上繁殖,收获毒液,用0.1%甲醛溶液灭活,加适量206佐剂,制成山羊痘油佐剂灭活疫苗.将疫苗以不同剂量皮下免疫接种不同种群的山羊.免疫后21 d,用AV40株强毒进行攻毒保护试验.结果显示,免疫剂量达0.5 mL时,疫苗对内蒙绒山羊的保护率为100%,对广西黑山羊的保护率为80%.实验表明,山羊痘灭活疫苗对山羊的免疫效果确实可靠.     

H5亚型禽流感疫苗对特禽及水禽的免疫效果观察

用H5N2亚型禽流感疫苗,分别免疫SPF鸡、乌鸡、珍珠鸡、贵妃鸡、火鸡、鸭及鹅,免疫后采血测定其HI抗体,观察我国现有的H5N2亚型禽流感疫苗对特禽及水禽的免疫效力.结果,免疫后3周,SPF鸡、乌鸡、珍珠鸡、贵妃鸡、火鸡、鸭及鹅的平均HI抗体滴度分别为2 7.2、2 7.6、2 4.3、2 4.83、2 4.6、2 6.2及2 5.3,乌鸡两次免疫,其中一次HI抗体为2 9.65.试验证明,SPF鸡、特禽及水禽用H5N2亚型禽流感疫苗免疫后,均能产生一定水平的HI抗体,但不同种类的家禽所产生的HI抗体滴度存在较大差异,以SPF鸡及乌鸡所产生的HI抗体滴度最高,而珍珠鸡、贵妃鸡及火鸡所产生的HI抗体滴度较低,水禽对H5N2亚型禽流感疫苗可产生一定水平的HI抗体.     

中药复方总多糖及其含药血清对小白鼠免疫功能的影响

分别给小鼠灌服复方总多糖、复方水煎剂、黄芪多糖、生理盐水后制备含药血清,用MTT法测定小鼠淋巴细胞增殖程度,用酶法一氧化氮试剂盒测定腹腔巨噬细胞一氧化氮的生成量,同时与各种药物的体外实验相比较.结果显示,复方总多糖及其含药血清均能促进小鼠脾脏淋巴细胞增殖和腹腔巨噬细胞一氧化氮的生成量,且效果优于复方水煎剂和黄芪多糖.     

旱地莜麦多目标动态施肥模式研究

建立莜麦籽粒产量、生物产量、籽粒蛋白质产量、总蛋白质产量与施氮总量及追施比例之间的效应方程,求解不同边际利润下的最佳施氮量及追施比例。结果表明施氮量改变,直接影响最佳追施比例、籽粒产量、蛋白质产量和生物产量等,施氮量在17.25～120.75kg/hm2区间内,各种目标产量随施氮量的增加而稳定增加,在合理的施氮量区间内实现既定产量,施氮总量与追施比例可以消长互替,降低追施比例则增加氮素总量,或增加追施比例则可以减少氮素总量。得出了不同目标产量时的最佳氮肥用量与追施比例和对应于氮肥不同用量的最佳追施比例及理论产量的动态施肥模式的数学方程。     

Study on the activation of blood platelets by propylene-acidamide grafted polypropylene membrane in vitro

AIM: To evaluate the blood compatibility of a new bioartificial reactor membranous material (propylene-acidamide grafted polypropylene membrane, PP-g-AAm) in vitro. METHODS: Contacted PP-g-AAm membrane and PP (polypropylene) membrane with platelet-rich plasma in a swing bed, 37 ℃, to simulate the conditions in vivo, and another group of PRP without any membranes was set as control group. ELISA was used to study the expression of β-thromboglobulin, and flow cytometry was used to study CD62P and CD63 expression of the activated blood platelets after contacting the two kinds of membranes with PRP. Scanning electrical microscopy was used to study the configuration and numbers of platelet cells adhered on the membranes. RESULTS: After contacting with PRP 30 min, β-TG expression showed marked difference between the two kinds of material groups and the control group (P<0.01, P<0.05), and the difference between the two kinds of membrane groups was also significant (P<0.05). There were obviously differences on the expression of CD62P and CD63 between the two kinds of membranes after contacting with PRP for 30 min (P<0.05，P<0.01). When enlarged 10 000 times, the disfiguration of the platelet cells adhered on the two kinds of membranes after one hour were found by scanning electrical microscopy, and the numbers of platelets on the PP membrane were more than the PP-g-AAm membrane markedly. CONCLUSION: The PP-g-AAm membrane has better blood compatibility than the PP membrane.